抗氧化物

在中国食品添加剂产业的品种结构中，抗氧化剂是最薄弱的一环。尤其是天然抗氧化剂，国外共有商品47种，抗氧化效果明显优于BHA和BHT的有迷迭香提取物，其他如鼠尾草提取物、甘草抗氧化物、茶多酚、鞣花酸、向日葵籽提取物等；而中国批准使用的仅有茶多酚、植酸（钠）、磷脂、甘草抗氧化物等少数几种等。以天然食用抗氧化剂取代合成抗氧化剂是今后食品工业的发展趋势，开发具有本土资源特色和自主知识产权的实用、高效、成本低廉的天然抗氧化剂更是重中之重。中国地域辽阔，资源丰富，有着几千年药食同源的传统，发展天然、营养、多功能的食品添加剂有着独特的优势。

竹叶中国素有“竹子王国”之称，境内有竹类40多属400余种，竹林面积约400万公顷。竹子以其独特的生物学、生态学及多用途等特点，日益受到人们的重视，在中国可持续发展战略中正发挥着越来越重要的作用。中国在竹叶有效成分的研究和开发方面处于国际领先水平。从1998年起，笔者及其合作者对竹叶黄酮的抗脂质过氧化活性做了大量研究。如分子水平的体外模拟试验表明，金毛竹（淡竹）叶提取物显著抑制了由AAPH诱导的脂质体的过氧化，防止了Cu++中介的人类血清低密度脂蛋白胆固醇的氧化；在麦乳精（阿华田）中强化1%的竹叶提取物，显著提高了制品的抗自由基和抗氧化能力，并保护了其中VA和VE的活性；在啤酒中强化一定量的竹叶提取物后，抗氧化性能和储存稳定性大大增强，双乙酰回升受到显著抑制；对竹叶黄酮进行控制性酸水解，使其部分黄酮糖苷转化成苷元，亲油性有了显著改善，TBA快速测定法表明，在菜籽油体系中，水解苷元显示了与BHT可比的抗氧化活性，其有效浓度在0．2‰左右；改良烘箱法试验表明，水解苷元抑制猪油过氧化的能力与槲皮素和茶多酚相似；化学发光法测定的结果显示，水解苷元的清．OH活性接近槲皮素。表明竹叶黄酮具有作为天然抗氧化剂的开发潜力。2002年“竹叶抗氧剂”被国家经贸委列为《国家级轻工业新产品开发指南》中“食品添加剂行业优先开发产品汇总表”的第一项。

中国从2002年起，按照《中华人民共和国食品添加剂使用卫生标准》的要求，对竹叶抗氧化物（AntioxidantofBambooleaves，简写为AOB）的生产工艺、理化性质、质量标准、毒理试验结果、应用效果（应用范围、最大应用量）等进行了系统研究。

1．生产工艺

AOB是一种从禾本科（Graminae）、竹亚科（Bambusoideae）、刚竹属（PhyllostachysSieb．etZucc）的淡竹犤Phyllostachysnigravar．hnonis（Bean）StepfexRendle犦等叶子中得到的酚性制剂。其生产工艺既可以是在原有专利技术的基础上进一步结晶所得，也可以是在竹叶粗提物的基础上，采用组合式膜分离技术精制而成。

2．化学组成

AOB的抗氧化成分包括黄酮、内酯和酚酸类化合物，其总黄酮含量30%。由于经柱层析和逆流色谱进一步分离后所得组分的抗氧化效果都低于或等同于本品，所以说这是一组复杂的、而又具有相互协同增效作用的混合物。其中黄酮类化合物主要是黄酮碳苷，包括荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和异牡荆苷等；内酯类化合物主要是羟基香豆素及其糖苷；酚酸类化合物主要是肉桂酸的衍生物，包括绿原酸、咖啡酸和阿魏酸等。

3．鉴别方法

AOB的外观为黄色或棕黄色的粉末或颗粒，可溶于水和乙醇，略溶于丙酮、正丁醇、乙酸乙酯等；AOB有吸湿性，在干燥状态时相当稳定。化学试剂鉴别：取本品0．5g溶于100mL95%的乙醇中，按下法鉴别：取上述溶液1mL，加1%FeCl3－乙醇溶液2～3滴，应显深蓝色或蓝紫色。取上述溶液1mL，加1%AlCl3－乙醇溶液2～3滴，应呈鲜黄色；取本品0．5g，加入10mL乙醚，超声波辅助萃取30秒，过滤。取滤液1mL，置70～90℃的水浴中挥干乙醚后，依次加入2%的间二硝基苯溶液（用95%乙醇配制）和2．5mol/L的KOH水溶液各1mL，立即出现微红色，放入上述热水浴中，迅速变成深紫红色。经溴化钾压片后的红外光谱图显示，在3400、2900、1610、1520、1080cm－1等附近有特征性吸收。让其溶于光谱纯甲醇后，在200～600nm的波长范围内进行扫描，紫外光谱图显示，在240～400nm区域有两个主要的吸收峰，其中在240～280nm之间有一强吸收峰，在300～350nm之间有一次强吸收峰，呈现了植物黄酮制剂的典型特征。

4．安全性评价

竹叶竹叶在中国乃至东南亚的广大地区有着长期的食用和药用历史，1998年（淡）竹叶被卫生部批准列入了“药食两用的天然物名单”，以竹叶黄酮为内容物的“竹康宁”胶囊和片剂也分别于1999年和2002年获得了保健食品的批准文号。

浙江省疾病预防控制中心按照卫生部GB15193－1994《食品安全性毒理学评价程序和方法》对力夫牌竹叶抗氧化

竹叶物（AOB）进行了为期一年多的试验研究，结果表明：第一阶段大、小鼠急性及口毒性半数致死量（LD50）雌雄两性均大于10000mg/kg体重，按急性毒性分级标准判定，属实际无毒类。第二阶段Ames试验结果为阴性，小鼠骨髓细胞微核试验和小鼠精子畸形试验结果均为阴性，提示该样品无致突变性。第三阶段大鼠90天喂养试验设低、中、高三个剂量组，分别相当于人最大可能摄入量（860mg/d）的100、200、300倍，试验结果表明，各项指标均未见明显毒性反应，AOB的最大无作用剂量为4．3g/kg体重；传统致畸试验显示各剂量组各项指标均未见有明显的母体毒性和胚胎毒性、致畸性；大鼠一代繁殖试验母体效应、胎仔效应各项指标均未见明显毒性反应。代谢试验表明，AOB中四种碳苷黄酮在大鼠胃肠道内均无直接吸收，灌胃后各个时相血浆和主要组织器官（肝、肾、脑及肌肉组织）均无检出，灌胃后0．5h、1h、1．5h、2h、3h、4h、6h、8h、12h在胃肠道及其内容物中，四种碳苷的回收率分别为83．3%、68．8%、65．0%、61．1%、59．9%、59．1%、57．8%、53．7%、51．7%；一次性灌胃给予受试物，24h后从粪便中检出的原型物占摄入量的27．6%，尿液中未见原形物排出。AOB中的另一主要羟基香豆素类组分则主要经血液途径吸收。灌胃后各时相在大鼠肝脏、脑及肌肉组织均无检出，在血液及肾脏从有检出；给予受试物24h后该组分在尿液中检出1．9%，在粪便中未检出