材料类别:组织选用植物的 顶芽、带 腋芽的茎段。
培养条件:诱导分化 培养基:⑴MS+6-BA0.5mg/L(单位下同);⑵Ms+6-BAl;⑶MS+6-BA2+2,4-D1。
诱导生根与生长培养基:⑷MS;⑸MS+IAA2;⑹MS+6-BA1+2,4-D1。每种培养基均附加3%蔗糖,0.7%琼脂,pH5.8。
培养温度:(25士l)℃,光照每天12小时,光照度2000lx左右。
生长分化:无菌材料的获得:将王瓜种子用70%乙醇浸泡30秒,取出水洗,然后用0.7%次氯酸钠灭菌20分钟,再用 无菌水冲洗3-4次,种植于MS培养基上。待苗长至高5厘米、具6片真叶时,剪其顶芽、带腋芽的茎段作外植体。
生芽诱导:丛生芽的 诱导,将外植体种植于分化培养基上,5天左右,在茎的两端和顶芽的基部开始愈伤化,颜色有点土黄色。10天左右,在⑴、⑵培养基上的叶腋和茎顶开始生出小芽,但生长缓慢。20天左右,⑴培养基上每个外植体产生12个左右的丛生芽与小苗,小苗叶片非常细小,显生长不良态势;在⑵上一般仅1-2个芽,生长较⑴上的差;而在⑶上仅愈伤化,没有芽形成。同时在更高浓度的6-BA培养,发现外植体愈伤化更严重,而且粘稠,无芽形成。由此说明只有低浓度的6-BA才能促进芽的形成。
分化培养基上形成的丛生芽切下移至生根与生长培养基。在⑸上5天可看到叶片明显增大,7天左右开始生根,根较粗也较多;在⑷上要10天左右才看到叶的增大与生根,且根较细数目少,根上的细分枝较多;芽在⑸上的生长速度明显快于⑷;而⑹上的小芽在靠近培养基的基部开始 愈伤,小芽生长缓慢,几乎停止生长。所以IAA不仅能促进王瓜的生根,而且能进一步促进它的生长,而2,4-D则促进愈伤化,不利于生根。
管苗移栽:将培养有 试管苗的三角烧瓶打开,在温室中炼苗3天然后取出洗去根部的琼脂,移至盛有蛙石与泥炭(1:l)的花钵中,每天浇含MS大量元素的稀释培养液,移栽成活率64%。